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1. 填装之前,检查层析柱各接头、部件不能有破损漏气,并将层析柱清洗干净,壁上不要有残留小颗粒,会影响层析效果;

2. 确保填料、层析柱、所有的缓冲液以及样品温度一致,温度不一致容易导致产生气泡。

3. 所有过柱子的液体(包括水、平衡缓冲液、洗脱缓冲液、再生溶液)用0.45um滤膜抽滤,并进行超声脱气,注意填料不可超声脱气;

4. 将填料用纯水清洗几遍,彻底洗掉保存液,并将上层的细小颗粒弃去;

5. 关闭层析柱出水口,玻璃棒引流往层析柱内倒入约1/4柱体积的水(或缓冲液),务必使底端无气泡;

6. 将填料用玻璃棒搅匀成悬浆,用玻璃棒引流,均匀的一次性倒入柱子内,注意务必不要产生气泡,待柱子内填料稳定,打开出液管,使凝胶在柱内自由沉降。

7. 如果是手动操作,将柱子用纯水冲几个柱体积,使柱床稳定;

如果仪器操作,用逐渐加大流速的方法,将填料压实,注意:既不能过松,也不能过紧,要注意不能超过填料的最大耐压。

8. 上样前,样品要进行离心或者用0.45um滤膜过滤;

注意:

1. 始终保持柱内液面高于凝胶表面,否则水分蒸发,凝胶变干,影响填料的纯化效果,有转换接头的柱子,需要保证进出液管密封;

2. 防止液体流干,使柱内混入大量气泡,影响纯化效果;

3. 切莫超过填料的最大耐压,以免对填料造成不可逆的损坏;

4. 注意不要超过层析柱的最大耐压,超过最大耐压可能会漏液,甚至冲掉柱头;

5. 凝胶一般都比较昂贵,需小心操作,实验后回收,尽量避免污染、浪费和损失。

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